Des méthodes flexibles pour une détermination de viabilité et de comptage de cellules

Viabilité et comptage de cellules en une étape sans prétraitement

Figure 1. Il faut simplement charger la suspension cellulaire dans la Via1-Cassette™ pour une détermination de viabilité et un comptage de cellules. A l’intérieur de la Via1-Cassette™ sont incluses de deux colorations fluorescentes, l’acridine d’orange et le DAPI qui colorent automatiquement et respectivement la population totale et la population morte de cellules.
La Via1-Cassette™ est calibrée en volume et assure une détermination de viabilité et un comptage de cellules de haute précision.

Une viabilité et un comptage de cellules à grande vitesse sur un échantillon de très petit volume

Figure 2. La lame à chambres multiples A8™ donne la possibilité de faire un comptage de cellules et un test de viabilité à grande vitesse de cellules d’insectes et de mammifères avec huit comptages en moins de trois minutes. Il faut simplement mélanger la suspension cellulaire avec les colorations fluorescentes, charger la chambre, puis appuyer sur ‘Marche’.
ChemoMetec offre des protocoles optimisés pour le comptage et la viabilité y compris pour les cellules agrégées ou les cellules se développant sur des microporteurs ou dans des cultures de sphères.

En comptant manuellement, les scientifiques peuvent visuellement vérifier le comptage. Cette vérification du comptage peut également être faite à partir du logiciel intuitif NucleoView qui est inclus avec le NC-3000™. Les diagrammes et les nuages de points sont liés rendant possible une vérification visuelle de la population cellulaire.

Figure 3. Le logiciel accompagnant NucleoView™ permet un couplage facile entre les images obtenues et les diagrammes montrant la fluorescence pour une détermination précise des évènements à compter.

Cycle cellulaire en deux étapes

L’analyse du cycle cellulaire est la méthode la plus fondamentale pour définir des anomalies dans la division cellulaire et ainsi définir les symptômes de dommage cellulaire. Avec le cycle cellulaire unique en deux étapes de ChemoMetec, le cycle cellulaire peut être obtenu en cinq minutes comprenant le traitement des cellules ! Un profil de cycle cellulaire sera affiché dans le logiciel accompagnant PlotManager et le poucentage ou les nombres d’évènements dans la G₀/G₁,la phase S, G₂ and sub-G₁ can be identified.


Figure 4. Test de cycle cellulaire en deux étapes de cellules non traitées et de cellules Jurkat traitées à la campthotécine. Les histogrammes montrant l’intensité d’ADN (DAPI) peuvent être utilisés pour définir les évènements en G₀/G₁, phase S G₂ et sous sub-G₁.

Le test d’apoptose

Le NucleoCounter^® NC-3000™ a cinq tests d’apoptose plug-and-play: le potential mitochondrial, l’Annexine V, la Caspase, la vitalité (VB-48™) et la fragmentation de l’ADN. ouvrant les stades précoces aux stades avancés, ces tests vous permettront une étude détaillée du progrès d’apoptose dans les cellules mammifères. Avec le logiciel accompagnant PlotManager, qui est facile à utiliser, une analyse de pointe des données peut facilement être effectuée. La possibilité unique de relier les images, les histogrammes et les diagrammes permet une analyse détaillée et précise des données.

Viabilité et analyse des cellules transfectées GFP

La protéine fluorescente verte (GFP) est fréquemment utilisée comme un marqueur pour la transfection dans la recherche et dans la production. Il est extrêmement important de déterminer l’effet de la transfection sur la viabilité cellulaire. Avec les tests de transfection GFP plug-and-play du NucleoCounter^® NC-3000™, le nombre de cellules transfectées GFP viables et mortes peut être défini avec une haute précision. Avec le module adaptable à l’utilisateur FlexiCyte™, le pourcentage de transfection des cellules exprimant des variantes xFP comme le RFP ou le YFP peut également être déterminé.

Figure 5 Toutes les cellules sont localisées avec la coloration d’ADN Hoechst 33342. Des cellules transfectées GFP ont une fluorescence verte alors que les cellules mortes colorées à l’IP seront rouges. Tous les canaux peuvent être visualisés sur image individuellement (A-C) ou en superposition (D), et les cellules analysées peuvent être montrées (E). Une analyse détaillée peut être effectuée avec le logiciel accompagnant PlotManager.

Le NC-3000™ validation GMP et prêt 21 CFR partie 11

Le NucleoCounter^® NC-3000™ est idéal pour le QC, la production et même les départements PD et R&D. La vérification des instruments et de la méthode en combinaison avec le 21 CFR partie 11 assure la performance de l’instrument et que celui-ci respecte les exigences et les demandes des industries pharmaceutiques et biotechnologiques. Des rapports PDF standardisés, le contrôle de l’utilisateur et les pistes d’audit permettent une documentation de toutes les procédures. La combinaison d’une haute précision et de l’influence limitée de l’utilisateur font du NucleoCounter^® NC-3000™ un cytomètre unique.

Des protocoles adaptable à l’utilisateur avec FlexiCyte™

Le module FlexiCyte™ permet aux utilisateurs d’effectuer des analyses cellulaires de pointe sur un large éventail de bio marqueurs et de protéines fluorescents sur des cellules mammifères. La combinaison de la lumière LED, de l’UV au rouge lointain, avec une sélection de filtres d’émission permet la détection d’une gamme de biomarqueurs fluorescents. ‘L’assistant d’adaptation de protocole’ guide l’utilisateur à travers une sélection de réglages optimaux. Après l’acquisition de l’image, les données cellulaires sont présentées dans le PlotManager dans soit des nuages de points, des histogrammes ou les deux. Une analyse détaillée des données peut être effectuée par le couplage entre les images et les diagrammes.


Figure 6.Combinaison possible de LED et de filtres d’émission dans le module FlexiCyte™ pour le NC-3000™.