NC-View™ est la partie logicielle du système NucleoCounter® NC-202™. Il utilise un algorithme puissant pour identifier et analyser avec précision les cellules individuelles au sein d’agrégats plus petits. Les pics d’intensité et les pentes correspondantes sont utilisés pour segmenter les objets par rapport aux niveaux d’intensité de fond. Les cellules qui sont proches les unes des autres présentent toujours des pics discrets identifiables, même si leurs pentes correspondantes peuvent se chevaucher (figure 2).

Figure 2 : Analyse d’image automatisée avec le logiciel NC-View™. Les images acquises avec l’instrument NucleoCounter^® sont instantanément traitées avec le logiciel NC-View™. Les pics de signaux en fluorescence ainsi que leur surface sont utilisés pour distinguer individuellement chaque cellule. La segmentation des cellules vivantes et mortes (vert et rouge respectivement) est superposée aux tracés de l’image pour faciliter le traitement de validation par l’utilisateur.

Le NucleoCounter^® est capable de segmenter les cellules dans de petits agrégats de moins de cinq cellules. Les échantillons avec des agrégats plus importants auront tendance à avoir des cellules qui se chevauchent les unes des autres, ce qui rend ces échantillons très difficiles à analyser. En effet, les comptages cellulaires manuels et automatisés basés sur des techniques de microscopie optique telles que la microscopie en champ clair et le contraste de phase ne permettent pas d’estimer les niveaux d’agrégation dans un échantillon. Grâce au NucleoCounter^® l’opérateur obtient une estimation du pourcentage d’agrégation dans l’échantillon afin de prendre une décision éclairée sur le choix d’utiliser un protocole dédié aux cellules agrégées, qui permettra alors une évaluation précise de la véritable cellule.

Certains types cellulaires (HEK, MCF-7, HepG2, iPSC, etc.), les cellules cultivées dans des sphères ou sur microporteurs et les échantillons de tissus auront tendance à former de grands amas qui résistent aux méthodes de séparation enzymatique ou mécanique. Les cellules individuelles de ces grands agrégats auront tendance à se superposer, ce qui réduit l’exactitude et la précision du comptage cellulaire. Le NC-View™ indiquera le pourcentage de cellules dans les agrégats de plus de cinq cellules afin de signaler les échantillons où l’agrégation des cellules pourrait affecter le comptage cellulaire. Un protocole dédié aux cellules agrégrées est recommandé pour de tels échantillons. Dans le protocole d’analyse des cellules agrégées, le nombre total de cellules provient d’une aliquote séparée de l’échantillon (figure 3). Le processus de lyse perturbe la membrane cellulaire, démantelant les amas et libérant les noyaux à colorer dans la solution. Etant donné que les cellules mortes sont généralement moins abondantes et ont tendance à se détacher des agrégats, le comptage des cellules mortes peut toujours être basé sur l’aliquote non lysée (figure 3).

Représentation schématique du protocole « Aggregated Cells »