Amplifier la production de virus sans compromettre la fiabilité du processus
Chez CEVEC Pharmaceuticals
La croissance rapide du nombre de produits de thérapie génique a conduit à une augmentation parallèle du besoin de production industrielle de vecteurs viraux appropriés. Cependant, les systèmes de production actuels manquent souvent d’évolutivité et de fiabilité.
Les lignées cellulaires CAP-GT de CEVEC Pharmaceuticals offrent une nouvelle plate-forme pour la production industrielle de vecteurs viraux. Leurs lignées cellulaires CAP-GT sont dûment étayées par une documentation complète et conformes aux exigences réglementaires. En se multipliant dans une culture en suspension sans sérum à des densités élevées, les cellules fournissent une plate-forme de production de vecteurs entièrement évolutive qui garantit la reproductibilité de la transfection et offre un moyen de production de vecteurs viraux d’une grande efficacité.
La détection précise de l’efficacité de la transfection de la GFP constitue une étape cruciale de ce processus, mais la fiabilité des méthodes actuellement disponibles est souvent insuffisante alors même qu’elles nécessitent beaucoup de temps et de main-d’œuvre. Pour ces raisons, l’efficacité de la transfection de la GFP au CEVEC est systématiquement déterminée à l’aide du NucleoCounter® NC-3000™, un cytomètre en image sophistiqué, qui garantit la reproductibilité et l’analyse rapide de plusieurs échantillons.
Un processus de travail optimisé augmente les titres lentiviraux
Efficacité de la transfection de la GFP avec le NucleoCounter® NC-3000™ – Rapide et facile
La manipulation d’un grand nombre d’échantillons requiert une quantification fiable et rapide du nombre de cellules et de l’expression de la GFP. Grâce au NucleoCounter® NC-3000™ de paillasse, la fluorescence GFP peut facilement être déterminée. En quelques minutes, le NC-3000™ fournit à la fois le taux de transfection et celui de mort cellulaire. Tous les signaux sont quantifiés de manière automatique et les résultats sont affichés dans des tableaux, des histogrammes et des nuages de points.
En utilisant le NucleoCounter® NC-3000™, vous obtenez rapidement des résultats détaillés et reproductibles. De plus, il vous permet d’effectuer des inspections visuelles détaillées de vos cellules.
Voir le jeu complet de données dans l’affiche au format PDF ci-dessous.
Conclusion
Les conditions de production lentivirale basée sur la plate-forme CAP-GT ont été optimisées par la conception d’une approche expérimentale pour déterminer la densité cellulaire et la quantité d’ADN et de polyéthyléneimine (PEI). La supplémentation en lipides a permis de considérablement augmenter la production de particules infectieuses LV. Un protocole évolutif sans étape d’échange de support a été développé en exploitant le support CD-FortiCHO. Ce processus d’optimisation a abouti à une énorme amélioration des titres, même par rapport à ceux observés en ayant recours à des cellules adhérentes HEK293T. Grâce au NucleoCounter® NC-3000™, il a été possible d’obtenir une quantification rapide et fiable du nombre de cellules et de l’expression de la GFP pour une grande quantité d’échantillons.
Auteurs
Martina Graßl, Kerstin Hein, Simon Fradin, Helmut Kewes et Nicole Faust.