Comment compter plus efficacement les cellules cultivées sur des microporteurs
Cela ne prend que deux minutes avec les compteurs de cellules NucleoCounter®.
Les microporteurs offrent une méthode pratique pour cultiver des cellules adhérentes dans des bioréacteurs. Les cellules utilisées dans la production de vaccins, telles que les lignées cellulaires Vero et les cellules souches mésenchymateuses humaines (hMSCs), dépendent souvent de cette méthode.1–4
Les microporteurs permettent de cultiver un grand nombre de cellules dans un volume réduit, ce qui réduit la complexité du processus et les besoins en main-d’œuvre.
Les microporteurs fournissent une grande surface à laquelle les cellules adhérentes peuvent se fixer tout en leur permettant de se multiplier en suspension libre dans un bioréacteur (Figure 1).
La culture cellulaire sur microporteurs permet une production à grande échelle et peut facilement être intégrée à des processus existants.5
Protocole – Ne prend que deux minutes
Avant de compter les cellules cultivées sur des microporteurs, les cellules sont généralement séparées par trypsination. Les cellules sont ensuite comptées à l’aide de la méthode d’exclusion au bleu trypan, en utilisant un hémocytomètre. Ce processus peut prendre jusqu’à 40 minutes en raison du nombre d’étapes manuelles supplémentaires, qui peuvent toutes introduire des erreurs humaines (Figure 2).
Lors de l’utilisation du NucleoCounter® NC-202™, le processus ne prend que deux minutes. Il fonctionne en marquant les noyaux cellulaires par fluorescence, en deux étapes (Tableau 1). Consultez notre note d’application pour le protocole complet.
Tableau 1. Comptage des cellules cultivées sur des microporteurs à l’aide du NC-202™
| Étape | Action | Résultat |
| 1 | Ajouter le Tampon de Lyse, vortexer et compter à l’aide de la Via2-Cassette™ | Nombre total de cellules |
| 2 | Compter les cellules sans lyse en utilisant la Via2-Cassette™. | Nombre de cellules mortes |
Une méthode plus rapide et plus précise pour suivre la culture de cellules sur microporteurs
Le NC-202™ fonctionne avec la Via2-Cassette™ jetable (Figure 3), dans laquelle les échantillons de cellules sont chargés. À l’intérieur de la cassette, l’échantillon est instantanément marqué par les colorants fluorescents acridine orange (AO) et 4′,6-diamidino-2-phénylindole (DAPI), qui sont préchargés dans la cassette. Cette technologie combine l’échantillonnage des cellules, la coloration et le chargement dans un seul flux de travail.
Dans la première étape, les cellules sont lysées à l’aide de notre Tampon de Lyse 1, une solution acide qui libère rapidement les noyaux des microporteurs en suspension. Lorsque cet échantillon est chargé dans le NC-202™, le logiciel NC-View™ fournit le nombre total de cellules.
Dans la deuxième étape, les microporteurs intacts sont échantillonnés par la Via2-Cassette™ et insérés dans le NC-202™ sans aucun tampon de lyse, comme n’importe quel autre échantillon de cellules. Le DAPI à l’intérieur de la cassette marque les cellules mortes, révélant ainsi le nombre de cellules mortes. Le logiciel fournit ensuite la viabilité pour l’ensemble de l’échantillon.
Une fois l’échantillon chargé, la Via2-Cassette™ est placée dans le NC-202™ et l’utilisateur appuie sur « RUNr ». Juste 30 secondes plus tard, le logiciel NC-View™ affiche le nombre de cellules et la viabilité.
Automatisé. Précis. Rapide.
Le comptage automatisé des cellules à l’aide du NC-202™ est une méthode précise et fiable pour mesurer le nombre de cellules et la viabilité dans les cultures sur microporteurs.
Le flux de travail du NucleoCounter® élimine plusieurs étapes de centrifugation, de pipetage et d’incubation, ce qui réduit les risques d’erreurs humaines. Cela permet d’obtenir une meilleure précision, une meilleure reproductibilité et un produit final de qualité, tout en économisant du temps.
Références
- Yang J, Guertin P, Jia G, Lv Z, Yang H, Ju D. Large-scale microcarrier culture of HEK293T cells and Vero cells in single-use bioreactors. AMB Express. 2019;9(1). doi:10.1186/s13568-019-0794-5
- Nienow AW, Rafiq QA, Coopman K, Hewitt CJ. A potentially scalable method for the harvesting of hMSCs from microcarriers. Biochem Eng J. 2014;85:79-88. doi:10.1016/j.bej.2014.02.005
- Kiesslich S, Kamen AA. Vero cell upstream bioprocess development for the production of viral vectors and vaccines. Biotechnol Adv. 2020;44. doi:10.1016/j.biotechadv.2020.107608
- Phillips BW, Horne R, Lay TS, Rust WL, Teck TT, Crook JM. Attachment and growth of human embryonic stem cells on microcarriers. J Biotechnol. 2008;138(1-2):24-32. doi:10.1016/J.JBIOTEC.2008.07.1997
- Lev R, Bar-Am O, Lati Y, Guardiola O, Minchiotti G, Seliktar D. Biomanufacturing Recombinantly Expressed Cripto-1 Protein in Anchorage-Dependent Mammalian Cells Growing in Suspension Bioreactors within a Three-Dimensional Hydrogel Microcarrier. Gels. 2023;9(3). doi:10.3390/gels9030243