Protocoles pour cellules agrégées avec le NucleoCounter® NC-200™
Comptage et mesure de la viabilité précis des cellules fortement agrégées
Principe du test cellules agrégées avec le NucleoCounter® NC-200™
Figure 1. Détermination de la concentration cellulaire de cellules (agrégées) MCF7. Les noyaux cellulaires sont relargués dans le milieu après une lyse spécifique des membranes plasmiques en utilisant les réactifs A100 et B puis analysés avec le protocole « Count of Aggregated Cells – A100 and B Assay ». La population cellulaire (ou nucléaire) totale est marquée au DAPI et apparait en bleu. Un encadré montre une partie de l’image. Les résultats sont présentés en bas à droite et une analyse plus complète est montrée dans un onglet spécifique.
Les cellules agrégées, et donc se chevauchant les unes aux autres, sont impossible a dénombrer lorsqu’on utilise des hématimètres ou des appareils reposant sur la lumière visible. Avec le NucleoCounter® NC-200™, compter des cellules agrégées ne peut être plus précis puisque ces amas sont désagrégés.
Reposant sur un tampon de lyse mis au point par ChemoMetec A/S et un à protocole à 2 étapes, il est possible de dénombrer et mesurer le nombre total de cellules et leur viabilité quel que soit leur degré d’agrégation.
- Lors de la 1ère étape, toutes les cellules sont lysées et les noyaux relargués sont dénombrés grâce à un marquage spécifique de l’ADN.
- Lors de la 2ème étape, seules les cellules mortes sont dénombrées.
En 2 minutes, le NucleoCounter®NC-200™ va donc renvoyer le nombre exact de cellules totales et leur viabilité.
La méthode standard!
Avec plus de 3000 machines installées à ce jour, le NucleoCounter® est devenu le standard du comptage cellulaire dans la plupart des laboratoires à travers le monde.
Les clients aux USA, en Europe et en Asia utilisent le NucleoCounter® NC-200™ pour leur méthode de production mais aussi en cancérologie ou pour la recherche sur les cellules souches où la précision et la reproductibilité sont d’une importance majeure.
Une sélection de publications:
2. Characterization of genotoxic response to 15 multiwalled carbon nanotubes with variable physicochemicalproperties including surface functionalizations in the FE1 Jackson P, Kling K, Jensen KA, et al. Environ Mol Mutagen. 2014 epub
3. A 3D sphere culture system containing functional polymers for large-scale human pluripotent stem cellproduction Otsuji TG, Bin J, Yoshimura A, et al. Stem Cell Reports. April 2014
Aggregation Assays (.PDF):Oops! We could not locate your form.
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